8908180147 61 دانشگاه علوم پزشكي گلستان مركز تحقيقات بيوشيمي و اختلالات متابوليك Expression of P-gp and MRP1 genes in acute leukemia patients in North East Iran بررسي بيان ژن P-gp و MRP1در بيماران مبتلا به لوكمي حاد در شمال شرق ايران سرطان خون يكي از سرطان هاي شايع درجهان شناخته شده است. لوسمي بيماري پيشرونده و بدخيم اعضاي خون ساز بدن است كه با تكثير و تكامل ناقص گويچه‌هاي سفيد خون و پيش سازهاي آن در خون و مغز استخوان ايجاد مي‌شود. لوسمي بر اساس سرعت پيشرفت روند بيماري و نوع گويچه سفيد خون كه دچار تراريختگي (هيبريد) و سرطان شده به چهار گروه تقسيم مي شودكه دو نوع شايع آن ) ALLلوسمي لنفو بلاستي حاد ( و AML(لوسمي ميلوئيدي حاد) مي باشد.
يكي ازمشكلات مبتلايان به سرطان خون مقاومت دارويي است دراين حالت سلولهاي توموري نسبت به داروهاي مختلف ضد سرطان(مثل : سيتارابين وآنتراسيكلين) كه از نظرعملكرد و ساختمان شيميايي با هم متفاوت هستند مقاوم مي شوند كه اين وضعيت اصطلاحاّ مقاومت دارويي چندگانه (Multi Drug Resistance) يا بطور اختصار MDR ناميده مي شوند.يكي ازمهمترين دلايل مقاومت به دارو، بيان بالاي پروتئين هاي غشايي وابسته به ATP، ازدسته ابرخانواده ناقلين غشايي ABC(ATP Binding Cassette) مي باشد. گليكوپروتئين PوMRP1 نقش مهمي را در مقاومت دارويي برعهده دارند. بيان بالاي اين پروتئين ها در سلو ل هاي سرطاني، مهمترين مانع بر سر راه درمان سرطان به شمارمي رود. باتوجه به نتايج متفاوت در مطالعات متعدد و عدم مشخص بودن تغييرات مقدار MRP1 و P-gp در بيماران لوكمي حاد در نقاط متفاوت، مابرآن شديم در مطالعه حاضر ارتباط ممكن بين سطح بيان ژن P-gpو MRP1 و ظهور پديده MDRو نتايج كلينيكي آنها را در بيماران لوسمي حاد در شمال شرق ايران بررسي كنيم. ژن P-gp و MRP1- لوكمي حاد- شمال و شرق ايران 1293321600 24 باتوجه به نتايج متفاوت در مطالعات متعدد و عدم مشخص بودن تغييرات مقدار MRP1 و P-gp در بيماران لوكمي حاد در نقاط متفاوت، مابرآن شديم در مطالعه حاضر ارتباط ممكن بين سطح بيان ژن P-gpو MRP1 و ظهور پديده MDRو نتايج كلينيكي آنها را در بيماران لوسمي حاد در شمال شرق ايران بررسي كنيم. 1- تعيين و مقايسه سطح بيان ژن P-gp و MRP1 در سلولهاي بلاست مغز استخوان افراد مبتلا به لوكمي حاد قبل و بعد از شيمي درماني
2- مقايسه سطح بيان ژن P-gp و MRP1 در سلولهاي بلاست مغز استخوان افراد مبتلا به لوكمي حاد مقاوم به دارو و بهبوديافته
3- ارتباط سطح بيان ژن P-gp و MRP1 در سلولهاي بلاست مغز استخوان افراد مبتلا به لوكمي حاد با سن
4- ارتباط سطح بيان ژن P-gp و MRP1 در سلولهاي بلاست مغز استخوان افراد مبتلا به لوكمي حاد با نوع لوكمي حاد(AML و ALL)
5- تعيين و مقايسه مقدار MRP1و P-gp درسرم افراد مبتلا به لوكمي حاد قبل و بعد ازشيمي درماني
6- مقايسه مقدار P-gp و MRP1 در سرم افراد مبتلا به لوكمي حاد مقاوم به دارو و بهبوديافته
7- ارتباط سطح بيان ژن P-gp و MRP1 در سلولهاي بلاست مغز استخوان با مقدارآنها درسرم افراد مبتلا به لوكمي حاد دراين مطالعه افراد مراجعه كننده به بيمارستان كه طبق تشخيص پزشك انكولوژيست بيماران لوكمي حاد تشخيص داده مي شوند وارد مطالعه مي شوند و ازهمان نمونه هاي خون و مغزاستخوان بيماران كه بطور معمول با عنوان پروتكل تشخيصي براي هر بيماري در نظر گرفته مي شود استفاده مي شود. قبل ازآن، در مورد اهداف طرح به بيماران توضيح داده مي شود و پس از جلب رضايت آنها، رضايت كتبي اخذخواهدشد، با اين تذكركه نمونه گيري جداگانه اي انجام نمي شود و باهمان نمونه گيري معمول، آزمايشات موردنظر طرح هم اندازه گيري مي شود و دراين خصوص مجوزكميته اخلاق دانشگاه نيزاخذ مي شود. دراين مطالعه نتايج حاصل ازآزمايش درابتداي تشخيص و 28 روز بعد از شيمي درماني بيماران باهم مقايسه مي شوند كه اگر تعداد سلولهاي بلاست كمتر از 5%، تعداد نوتروفيل ها در هر ليتر خون بيشتر از 1.5 ×109 و تعداد پلاكتها بيشتر از 100×109 باشد، بيمار به داروهاي شيمي درماني جواب داده درغيراينصورت بيمار به درمان پاسخ نداده است. براي تعيين بيان ژن P-gp و MRP1 در سطح سلولهاي بلاست مغزاستخوان در افراد مبتلا به لوكمي حاد، پس از نمونه گيري از مغز استخوان كه بطور معمول با عنوان پروتكل تشخيصي براي هر بيماري در نظر گرفته مي شود، سلول هاي بلاست با استفاده از محلول فايكول و سانتريفوژ جدا مي شود و با استفاده از كيت RNA استخراج وسپس از روي Total RNA، CDNA ساخته مي شود (دراين آزمايش از كيت two step پروب دار كياژن استفاده مي شود كه البته يكي از مزيتهاي استفاده از كيتهاي two step اينست كه مي توان جهت تكرار تست از CDNA بدست آمده استفاده نمود ودوباره كار را از استخراج RNA شروع نكنيم) و بيان ژن P-gp وMRP1 با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي طراحي شده و روش Real Time-PCR اندازه گيري مي شود( در اين تحقيق ژن GAPDH براي نرمال سازي منظور مي گردد) و در نهايت جهت اطمينان ازتكثير ژنهاي موردنظر و فقدان باندهاي غيراختصاصي محصول PCR چندي از نمونه ها را مي توان بروي ژل آگاروز برد(40) و براي تعيين مقدار P-gp وMRP1 درسرم افراد مبتلا به لوكمي حاد، پس از نمونه گيري خون از افراد مبتلا به لوكمي حاد سريعا سرم آنها جدا مي شود و در فريزر 20- نگهداري مي شود و پس از جمع آوري نمونه ها براي تعيين مقدار P-gp وMRP1 درسرم ازكيت هاي تجاري اليزا استفاده مي شود. 130417500 دانشگاه علوم پزشكي گلستان 1293321600 0 بلي بلي فعال و منتشر شده 1309910400